Avaliação citogenética molecular de células do líquido pleural de pacientes com derrame pleural maligno / Molecular cytogenetic evaluation of pleural fluid cells in patients with malignant pleural effusion

Introdução O diagnóstico de derrame pleural maligno (DPM) se baseia no achado de células tumorais no líquido ou no tecido pleural. Resultados falsos positivos ou falsos negativos influenciam na escolha da melhor conduta terapêutica a ser tomada, além de alterar substancialmente o prognóstico desses pacientes. A sensibilidade do exame citológico é geralmente inferior a 70%, motivo pelo qual, métodos complementares são frequentemente associados. Fatores como tipo histológico, sítio primário e grau de invasibilidade do tumor são os principais responsáveis por esta variação. Dentre os exames complementares propostos, destacam-se a dosagem de marcadores tumorais no líquido pleural (LP), as técnicas citoquímicas, imunocitoquímicas e de marcadores de proliferação celular em células do LP, a análise da ploidia de DNA por citometria de fluxo (CF) ou estática (CE) e, mais recentemente, as técnicas de citogenética e de biologia molecular, como a técnica de hibridação in situ por fluorescência (FISH) e a técnica de amplificação multiplex por sondas ligação - dependentes (MLPA) estas, capazes de detectar alterações em regiões gênicas consideradas "alvo" para o desfecho neoplásico. Objetivos 1) Padronizar as técnicas de DNA ploidia, FISH e MLPA em amostras frescas de líquido pleural; 2) Testar a eficiência diagnóstica dos métodos da DNA ploidia e da FISH no diagnóstico de derrame pleural maligno e 3) Avaliar alterações no número de cópias no gene EGFR em metástases pleurais utilizando a técnica de MLPA. Métodos Foram incluídos 200 pacientes adultos portadores de derrame pleural (DP) com indicação de toracocentese. O diagnóstico histológico foi o padrão ouro para malignidade. Características clínicas, radiológicas, histológicas e de seguimento clínico foram considerados para a exclusão de malignidade, de maneira que 130 casos foram classificados como malignos e 70 como benignos. As 200 amostras de LP foram submetidas ao exame citológico e à FISH utilizando sondas...

Introduction The diagnosis of malignant pleural effusion (MPE) is based on the finding of tumor cells in the pleural fluid or tissue. False positive or false negative results influence the choice of the best therapeutic approach to be used with these patients and substantially change their prognosis. The sensitivity of the cytology is generally lesser than 70%, for which complementary methods are often associated. Factors such as tumor histological type, staging, primary site and potential of invasiveness are responsible for this variation. Among the proposed ancillary tests, we highlight the dosage of tumor markers in pleural fluid (PF), the cytochemical and immunocytochemical techniques, including markers of cell proliferation, DNA ploidy analysis by flow cytometry (FC) or static cytometry (EC) and more recently, the cytogenetics and molecular techniques, as the fluorescence in situ hybridization (FISH) and the multiplex ligation - dependent probe amplification (MLPA), capable of detecting changes in gene regions considered "target" for the neoplastic outcome. Objectives 1) To standardize the techniques of DNA ploidy, FISH and MLPA in fresh samples of pleural fluid; 2) To test the diagnosis efficiency of DNA ploidy and FISH in the diagnosis of malignant pleural effusion and 3) To evaluate changes in the copy number of the EGFR gene by using the MLPA technique in cases of pleural metastases. Methods We included 200 adult patients with pleural effusion and clinical indication for thoracentesis. The histological diagnosis was considered the gold standard for malignancy. Clinical follow-up, radiological and histological characteristics were considered for exclusion of malignancy, which ranked de cases as 130 malignant effusions and 70 as benign ones. All cases were submitted to cytology and FISH using centromeric probes for the chromosomes 11 and 17. Analysis of DNA ploidy by FC was performed in 45 cases and the MLPA for epidermal...

Morphometric evaluation of NB84, synaptophysin and AgNOR is useful for the histological diagnosis and prognosis in peripheral neuroblastic tumors (pNTs)

OBJECTIVE: To study the importance of NB84, synaptophysin and AgNOR and explore the quantitative association of these factors with diagnosis and outcome as well as the association between NB84 and AgNOR and other tumor and stromal factors in twenty-eight peripheral neuroblastic tumors. METHODS: We assessed AgNORs, NB84, synaptophysin and several other markers in tumor tissues from 28 patients with primary neuroblastic tumors. The treatment included: surgery for stage 1, chemotherapy and bone marrow transplantation for most of stages 3 and 4. Histochemistry, immunohistochemistry and morphometry were used to evaluate the amount of tumor staining for AgNOR, NB84 and synaptophysin; the outcome for our study was survival time until death due to recurrent neuroblastic tumors. RESULTS: Only stage (p<0.01), AgNOR (p<0.01), NB84 (p<0.01) and synaptophysin (p=0.01) reached statistical significance as prognostic indicators. CONCLUSIONS: Determination of NB84 and synaptophysin are useful tools for the diagnosis of peripheral neuroblastic tumors The association of the evaluation of AgNOR expression by the tumor cells may provide an important contribution to the prognostic evaluation and management approach of the patients.

OBJETIVO: Estudar a importância dos marcadores NB84 e AgNOR e explorar as relações quantitativas entre esses marcadores com o diagnóstico e prognóstico assim como as relações entre NB84 e AgNOR e outros marcadores tumorais e estromais em 28 tumores neuroblásticos periféricos. MÉTODOS: Examinamos AgNOR, NB84 e sinaptofisina e vários outros marcadores em tecidos tumorais de vinte e oito pacientes com tumors neuroblásticos primários. Tratamento dos pacientes incluiu: cirurgia para o estágio 1, quimioterapia e transplante de medula óssea para a maioria dos pacientes nos estágios 3 e 4. Utilizamos histoquímica, imunohistoquímica e morfometria para avaliar a intensidade e extensão de expressão do AgNOR, NB84 e sinaptofisina, tendo o prognóstico dos pacientes incluído o tempo de sobrevida até a morte por recurrência dos tumores neuroblásticos. RESULTADOS: Estadiamento (p<0.01), AgNOR (p<0.01), NB84 (p<0.01) e sinaptofisina (p=0.01) foram marcadores independents de sobrevida. CONCLUSÕES: A determinação dos marcadores NB84 e sinaptofisina mostrou-se como uma ferramenta útil no diagnóstico dos tumors neuroblásticos periféricos; a associação desses marcadores à expressão de AgNOR pelas células tumorais contribuiu à determinação do prognóstico e estabelecimento do protocolo terapêutico para os pacientes.

Quantificação da ploidia de DNA em neoplasias intra-epiteliais e invasivas do epitélio escamoso do colo uterino, utilizando sistema de análise computadorizado de imagens - estudo de casos em Recife - PE / DNA ploidy quantification in cervical intraepitelial neoplasia and squamous cell carcinoma by computer image analyse in cases of Recife - PE

No Brasil, o câncer de colo uterino é a segunda neoplasia maligna feminina mais frequente nas regiões Norte, Nordeste e Centro-Oeste, sendo uma das maiores incidências verificada no Recife. Os padrões aneuplóides de DNA são considerados um fator geralmente associado à malignidade sendo encontrados em diferentes graus de displasias. Os carcinomas da cérvix uterina geralmente exibem células nas quais o conteúdo de DNA está desviado significativamente do normal. Com o objetivo de determinar e quantificar possíveis variações de conteúdo do DNA nuclear, estudamos 32 neoplasias do epitélio escamoso do colo uterino, sendo 26 de carcinoma in situ e 6 de carcinoma invasivo. Os cortes histológicos foram submetidos à reação histoquímica de Feulgen, para marcação dos núcleos. O conteúdo de DNA de linfócitos foi estabelecido como padrão normal, diplóide, para comparação com o conteúdo de DNA das células neoplásicas e construção dos histogramas de ploidia de DNA entre essas células. Dos 32 casos avaliados, tanto as lesões intra-epiteliais como as invasivas, exibiram um padrão aneuplóide de DNA. A presença de DNA nas lesões intra-epiteliais sugere uma provável evolução dessas lesões para o caráter invasivo da doença.